Plasmide CRISPR d'Activation (h) VE-cadherin: sc-400063-ACT

CDH5 code la VE-cadhérine, une protéine des jonctions d’adhérence spécifique de l’endothélium, qui assure une adhésion cellule–cellule dépendante du calcium et maintient l’intégrité de la barrière vasculaire. La VE-cadhérine coordonne le remodelage jonctionnel avec la signalisation du VEGF, des programmes transcriptionnels dépendants de la β-caténine et des voies impliquant de petites GTPases qui régulent la polarité endothéliale, la perméabilité et le bourgeonnement angiogénique. Une altération de la fonction ou de l’expression de CDH5 est associée à une dysfonction endothéliale, une néovascularisation pathologique, une fuite vasculaire induite par l’inflammation et l’angiogenèse associée aux tumeurs, ce qui en fait un nœud clé de la recherche en biologie vasculaire. En tant que marqueur canonique de l’identité endothéliale, la VE-cadhérine est couramment utilisée pour étudier l’assemblage des jonctions, la mécanotransduction et les processus liés à la transition endothélio-mésenchymateuse.

VE-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VE-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VE-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VE-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VE-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.