VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401695

概要

PCDH12はVE-カドヘリン2をコードしており、これは血管内皮細胞に豊富に発現するカルシウム依存性の接着分子で、安定した細胞間接着と協調的なバリア形成を支えます。カドヘリン–カテニン複合体に関与し、さらにアクチン細胞骨格と連結することで、VE-カドヘリン2は接着結合（アドヘレンスジャンクション）の構築、内皮細胞の極性、ならびに血管新生リモデリングに伴う透過性制御に寄与します。その機能は、細胞骨格張力を左右する経路や、炎症性刺激・機械的刺激に対する内皮応答に影響する経路など、接着部位の動態を調節するシグナルプログラムとも交差しています。内皮の接着やバリア制御の破綻は血管機能障害の表現型と関連しており、疾患関連モデルにおける微小血管の完全性を研究するための機序的な手がかりとなります。

VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPCDH12遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PCDH12内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PCDH12のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VE-cadherin-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VE-cadherin-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PCDH12欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VE-cadherin-2の機能に不可欠なPCDH12エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PCDH12ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PCDH12遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VE-cadherin-2 HDRプラスミド（h）および VE-cadherin-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPCDH12ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPCDH12標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。