VE-cadherin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401695

Visão geral

PCDH12 codifica a VE-caderina-2, uma molécula de adesão dependente de cálcio enriquecida em células endoteliais vasculares, que sustenta junções célula–célula estáveis e a formação coordenada da barreira. Ao interagir com complexos caderina–catenina e ao se ligar ao citoesqueleto de actina, a VE-caderina-2 contribui para a organização das junções aderentes, a polaridade endotelial e a regulação da permeabilidade durante o remodelamento angiogênico. Sua atividade se cruza com programas de sinalização que modulam a dinâmica das junções, incluindo vias que influenciam a tensão do citoesqueleto e as respostas endoteliais a estímulos inflamatórios ou mecânicos. A desregulação da adesão endotelial e do controle de barreira é relevante para fenótipos de disfunção vascular e oferece um ponto de partida mecanístico para estudar a integridade microvascular em modelos relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VE-cadherin-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PCDH12 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PCDH12, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PCDH12 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VE-cadherin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PCDH12 para a investigação da sinalização de VE-cadherin-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PCDH12 críticos para a função VE-cadherin-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PCDH12 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VE-cadherin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo VE-cadherin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PCDH12. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VE-cadherin-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR VE-cadherin-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PCDH12 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PCDH12 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.