Plasmide CRISPR d'Activation (h) VE-cadherin-2: sc-401695-ACT

PCDH12 code la VE-cadhérine‑2, une protocadhérine dépendante du calcium particulièrement enrichie aux jonctions intercellulaires des cellules endothéliales, où elle soutient l’adhérence, l’intégrité de la barrière et une morphogenèse vasculaire coordonnée. Grâce à des interactions homophiles et à son couplage à des adaptateurs du cytosquelette et de signalisation, la VE‑cadhérine‑2 influence le remodelage des jonctions, la polarité cellulaire et des programmes de migration qui recoupent les réseaux de signalisation angiogéniques et inflammatoires. Une adhérence endothéliale et une perméabilité dérégulées, liées à une activité de PCDH12 altérée, ont été associées à des phénotypes de dysfonction vasculaire et à des troubles du développement neurovasculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la stabilité des vaisseaux et de la perfusion tissulaire. Comme les cadhérines jonctionnelles modulent aussi la transmigration des leucocytes et les réponses au stress de cisaillement, PCDH12 est fréquemment étudié dans des modèles d’activation endothéliale et de pathologie microvasculaire.

VE-cadherin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCDH12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VE-cadherin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCDH12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCDH12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VE-cadherin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCDH12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VE-cadherin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VE-cadherin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCDH12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.