VDUP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400664

Visão geral

A proteína interagente com tioredoxina (TXNIP), também conhecida como VDUP1, é um regulador sensível ao estado redox que se liga à tioredoxina para modular as respostas celulares ao estresse oxidativo e a homeostase redox. A TXNIP conecta a sinalização de nutrientes e de estresse ao controle metabólico ao influenciar a captação de glicose, a função mitocondrial e as respostas inflamatórias, e participa de vias como a sinalização de AMPK, o manejo de espécies reativas de oxigênio (ROS) e processos associados ao inflamassoma NLRP3. Alterações na expressão de TXNIP/VDUP1 têm sido associadas à desregulação metabólica, disfunção endotelial e estados inflamatórios, sendo frequentemente estudadas em contextos de complicações relacionadas ao diabetes, biologia cardiovascular e metabolismo de células cancerosas. Como um gene induzível por estresse, a TXNIP também é usada como marcador de leitura e como impulsionadora de programas transcricionais a jusante do estresse do retículo endoplasmático (RE) e da sinalização oxidativa.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VDUP1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TXNIP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TXNIP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TXNIP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VDUP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TXNIP para a investigação da sinalização de VDUP1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TXNIP críticos para a função VDUP1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TXNIP para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VDUP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo VDUP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TXNIP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VDUP1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR VDUP1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TXNIP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TXNIP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.