VCP Plasmide Double Nickase (h): sc-401052-NIC

La proteina contenente valosina (VCP/p97) è un’ATPasi AAA+ che accoppia l’idrolisi dell’ATP a eventi di estrazione e rimodellamento proteico in molteplici vie della proteostasi. VCP coordina l’elaborazione ubiquitina-dipendente dei substrati nella degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD), nel sistema ubiquitina–proteasoma e nell’autofagia selettiva, e contribuisce anche a processi associati alla cromatina e alla regolazione del ciclo cellulare. Attraverso interazioni con proteine adattatrici, VCP aiuta a mantenere l’omeostasi proteica e le risposte allo stress, collegando la sua attività a vie che governano il controllo di qualità mitocondriale e la segnalazione infiammatoria. La deregolazione della funzione di VCP e le perturbazioni associate a mutazioni sono state implicate in fenotipi di proteinopatie multisistemiche e nei meccanismi delle malattie neurodegenerative, rendendola un bersaglio rilevante per lo studio dello stress proteotossico e delle reti cellulari di controllo qualità.

VCP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VCP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VCP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VCP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VCP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.