Plasmide Double Nickase (h) VCP: sc-401052-NIC

La protéine contenant la valosine (VCP/p97) est une ATPase de la famille AAA+ qui couple l’hydrolyse de l’ATP à des événements d’extraction et de remodelage des protéines au sein de multiples voies de protéostasie. VCP coordonne le traitement des substrats dépendant de l’ubiquitine dans la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), le système ubiquitine–protéasome et l’autophagie sélective, et contribue également à des processus associés à la chromatine ainsi qu’à la régulation du cycle cellulaire. Par ses interactions avec des protéines adaptatrices, VCP aide à maintenir l’homéostasie protéique et les réponses au stress, reliant son activité à des voies qui gouvernent le contrôle qualité mitochondrial et la signalisation inflammatoire. Une fonction VCP dérégulée et des perturbations liées à des mutations ont été impliquées dans des phénotypes de protéinopathie multisystémique et des mécanismes de maladies neurodégénératives, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier le stress protéotoxique et les réseaux cellulaires de contrôle qualité.

VCP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VCP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VCP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VCP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VCP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.