VASP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423654

概要

Vasp は、血管拡張刺激性ホスホプロテイン（VASP）をコードしています。VASP は Ena/VASP ファミリーに属するアクチン制御タンパク質で、細胞移動の過程において、アクチンフィラメントの伸長、焦点接着のダイナミクス、ならびに膜突出の形成を協調的に制御します。VASP は cAMP/cGMP 依存性プロテインキナーゼおよび Rho ファミリー GTPase の下流シグナルを統合し、リン酸化状態を細胞骨格リモデリングやメカノトランスダクションと結び付けます。マウス細胞では、VASP は接着、バリア機能、方向性をもった移動の制御を通じて、血小板および内皮の機能、神経突起伸長、免疫細胞の運動性に寄与します。VASP 依存的なアクチン動態の破綻は、血管機能障害や血栓関連表現型、さらに炎症やがん生物学に関連する浸潤能の変化を示すモデルにおいて関与が示唆されています。

VASP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVasp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vasp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vaspのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VASPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VASPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vasp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VASPの機能に不可欠なVaspエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vaspゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VASP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVASP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vasp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VASP HDRプラスミド（m）および VASP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVaspホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVasp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。