Vasorin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404942-ACT

ヒトVASNは、血管平滑筋細胞に豊富に発現するI型膜貫通型糖タンパク質であるバソリン（vasorin）をコードしており、形質膜上での細胞間シグナル伝達を調節します。バソリンはTGF-βファミリーのリガンドに結合して隔離（sequestration）することができ、その結果、細胞外マトリックスのリモデリング、表現型スイッチング、移動を制御するSMAD依存的な転写プログラムに影響を及ぼします。これらの作用により、VASNは血管の発生や損傷応答に加え、線維化やがん関連ストローマのシグナル伝達に結びつく調節異常なリモデリング過程の文脈でも研究されています。TGF-β経路のシグナル強度や細胞表面でのシェディングが乱れる複数の疾患状況において、バソリン発現の変化が報告されています。

Vasorin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VASNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Vasorin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VASN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVASN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Vasorinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVASN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVasorin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVASN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVasorin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。