VAP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401777

概要

AOC3は血管接着タンパク質-1（VAP-1）をコードしており、VAP-1は内皮細胞および平滑筋細胞の表面に発現する分子で、白血球接着受容体として機能するとともに、銅依存性のセミカルバジド感受性アミン酸化酵素（SSAO）としても働きます。VAP-1は一次アミンの酸化的脱アミノ化を介して、アルデヒド、アンモニア、過酸化水素を産生し、血管のレドックス生物学と、内皮を介した免疫細胞トラフィッキングの制御とを結び付けます。VAP-1活性は、炎症性シグナル伝達、細胞間接着ダイナミクス、ならびに血管微小環境における細胞外マトリックスのリモデリングと交差します。AOC3/VAP-1の発現や酵素活性の制御破綻は、慢性炎症状態や血管の病態生物学と関連づけられており、内皮活性化および白血球の血管外遊走の研究における機構的ハブとしての利用を支持します。

VAP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAOC3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AOC3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AOC3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VAP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VAP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AOC3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VAP-1の機能に不可欠なAOC3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AOC3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VAP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVAP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AOC3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VAP-1 HDRプラスミド（h）および VAP-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAOC3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAOC3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。