Plasmide Double Nickase (m) VAMP-2: sc-423650-NIC

Vamp2 code la protéine membranaire associée aux vésicules 2 (VAMP‑2 ; synaptobrévine‑2), une v‑SNARE centrale qui s’apparie à des t‑SNAREs telles que SNAP25 et les syntaxines pour assurer la fusion membranaire lors de l’exocytose régulée. Dans les neurones et les cellules neuroendocrines de souris, VAMP‑2 est indispensable à l’arrimage des vésicules synaptiques et à la libération des neurotransmetteurs, et contribue aussi à des étapes du trafic vésiculaire liées au recyclage des endosomes vers la membrane plasmique. Grâce aux cycles d’assemblage et de désassemblage des complexes SNARE coordonnés par NSF/α‑SNAP, VAMP‑2 participe au maintien du renouvellement des vésicules présynaptiques et de la sécrétion couplée au stimulus. Les altérations de la fonction des SNARE et de la dynamique de fusion des vésicules sont largement étudiées dans le cadre des mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que des phénotypes métaboliques impliquant des signalisations dépendantes de la sécrétion.

VAMP-2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Vamp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Vamp2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Vamp2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Vamp2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.