Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase A1: sc-400975-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide V-ATPase A1 Double Nickase (h) et le plasmide V-ATPase A1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATP6V0A1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: V-ATPase A1 Antibody (E-8): sc-374475
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase A1 | sc-400975-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) V-ATPase A1 | sc-400975-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0A1 code l’isoforme a1 de la sous-unité a du domaine V0 de la H\+-ATPase vacuolaire (V-ATPase), une pompe à protons multisous-unités qui acidifie les endosomes, les lysosomes et les vésicules de sécrétion. L’acidification des organites assurée par la V-ATPase soutient l’endocytose médiée par les récepteurs, la dégradation lysosomale, l’autophagie et le trafic vésiculaire, et elle influence la signalisation mTORC1 ainsi que la détection cellulaire des nutriments via la fonction lysosomale. En contrôlant le pH luminal, la V-ATPase A1 contribue également à la protéostasie et aux événements de fusion membranaire nécessaires à un tri efficace du cargo. Le dérèglement de l’activité de la V-ATPase et de l’acidification endolysosomale a été associé à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, à une altération de la fonction synaptique et, plus largement, à des défauts de l’homéostasie cellulaire pertinents pour les mécanismes de la maladie.
V-ATPase A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP6V0A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP6V0A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP6V0A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP6V0A1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.