V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-400975

概述

ATP6V0A1 编码液泡型 H\+-ATP 酶（V-ATPase）V0 区“a”亚基的 a1 同工型。V-ATPase 是由多个亚基组成的质子泵，负责使内体、溶酶体和分泌囊泡酸化。通过建立腔内 pH 梯度，V-ATPase A1 支持受体介导的内吞作用、溶酶体蛋白水解、自噬-溶酶体通量以及囊泡运输，并参与离子稳态与细胞器成熟。V-ATPase 依赖的酸化过程一旦受扰，会与蛋白质周转和膜运输缺陷相关，并进一步影响细胞应激反应，以及神经退行性疾病和肿瘤相关表型。作为细胞器酸化的核心调控因子，V-ATPase A1 常被用于研究营养感知通路、溶酶体处的 mTORC1 信号以及内体-溶酶体系统动力学等过程。

V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中ATP6V0A1基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对ATP6V0A1基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。

多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏ATP6V0A1开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使V-ATPase A1蛋白表达失活。

该CRISPR敲除系统能够高效构建ATP6V0A1缺失的细胞模型，用于V-ATPase A1信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。

主要特点

• 针对对 V-ATPase A1 功能至关重要的 ATP6V0A1 外显子的 sgRNA
  通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
  GFP 报告基因用于识别转染细胞
  针对多个 ATP6V0A1 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
  兼容转染递送

设计变体

CRISPRs +/- HDR

• 由 V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 ATP6V0A1 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
  由 V-ATPase A1 HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 V-ATPase A1 HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由ATP6V0A1同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定ATP6V0A1靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。