UTX CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402761-ACT

Das humane KDM6A-Gen kodiert UTX, eine Histon-Demethylase mit Jumonji-C-(JmjC)-Domäne, die die Entfernung von H3K27me3 katalysiert und damit der Polycomb-vermittelten Repression entgegenwirkt, um transkriptionelle Kompetenz zu fördern. UTX wirkt innerhalb von Chromatin-Remodeling-Netzwerken, einschließlich einer funktionellen Kopplung an die COMPASS/MLL-assoziierte H3K4-Methylierung und der Regulation von Genprogrammen, die die Linienfestlegung steuern. Über diese Aktivitäten beeinflusst KDM6A die Zellzykluskontrolle, Differenzierung und die Aufrechterhaltung epigenetischer Zustände in mehreren Zelltypen. Eine veränderte KDM6A/UTX-Funktion wird häufig im Kontext der fehlregulierten epigenetischen Landschaften untersucht, wie sie in der Krebsbiologie und bei Entwicklungsstörungen beobachtet werden.

UTX Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KDM6A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UTX Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KDM6A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KDM6A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UTX-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KDM6A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UTX-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UTX-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KDM6A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.