USP6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406687-ACT

USP6（ubiquitin specific peptidase 6）は、ユビキチン結合を解除することでタンパク質の安定性やシグナル伝達の出力を調節する脱ユビキチン化酵素をコードしています。ユビキチン依存的な分解（ターンオーバー）やトラフィッキングの制御を介して、USP6は受容体シグナル伝達、細胞骨格リモデリング、炎症性の転写プログラム（NF-κB関連応答を含む）に結びつく経路に影響を及ぼし得ます。USP6の発現異常は、動脈瘤様骨嚢腫や結節性筋膜炎などの良性間葉系腫瘍と強く関連しており、これらではプロモーター置換（promoter swapping）イベントにより異常な転写が駆動されます。その結果、脱ユビキチン化の変化が細胞内シグナル伝達ネットワークや腫瘍微小環境に関連する表現型をどのように再構築するのかという観点から、USP6は広く研究されています。

USP6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USP6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

USP6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USP6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSP6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性USP6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSP6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUSP6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSP6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUSP6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。