Partículas Lentivirales de Activación (m2) USP45: sc-429548-LAC-2

El gen murino Usp45 codifica la enzima desubiquitinante USP45, una proteasa específica de ubiquitina que regula el recambio proteico al eliminar cadenas de ubiquitina y, de este modo, modular la estabilidad y la actividad de sustratos nucleares clave. Se ha implicado a USP45 en el mantenimiento del genoma por sus funciones en la reparación del ADN y en las respuestas al estrés asociado a la replicación, lo que la vincula con vías que preservan la integridad de la cromatina y coordinan la progresión del ciclo celular. La desubiquitinación desregulada y el manejo deficiente del daño en el ADN asociados a la alteración de USP45 son relevantes para estudios de fenotipos de inestabilidad genómica y mecanismos vinculados al cáncer. Las herramientas de investigación para Usp45/USP45 respaldan investigaciones sobre la señalización de ubiquitina, el mapeo de redes de respuesta al daño del ADN y la genómica funcional en modelos celulares murinos y modelos in vivo.

Las partículas de activación lentiviral USP45 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Usp45 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral USP45 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Usp45, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de USP45. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Usp45 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.