Plasmide Double Nickase (m) USP32: sc-433591-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) USP32 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide USP32 Double Nickase (m) et le plasmide USP32 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Usp32. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: USP32 Antibody (A-10): sc-374465
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) USP32 | sc-433591-NIC | 20 µg | $410.00 |
USP32 (Usp32) chez la souris code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui régule la stabilité des protéines et la sortie des voies de signalisation en retirant des chaînes d’ubiquitine de substrats sélectionnés, influençant ainsi la protéostasie et l’équilibre entre recyclage et dégradation. En tant qu’enzyme de désubiquitination, USP32 est associée au contrôle, dépendant de l’ubiquitine, du trafic des récepteurs, de la dynamique endosomale et des voies de signalisation en aval qui coordonnent la croissance cellulaire et les réponses au stress. Une désubiquitination altérée peut perturber la cinétique et l’amplitude des voies, contribuant à une prolifération dérégulée, à une signalisation de survie aberrante et à des changements de l’homéostasie cellulaire. En recherche biomédicale, Usp32 est donc étudié dans le contexte de la régulation du système ubiquitine, des réseaux de signalisation associés aux membranes et de mécanismes pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles de la protéostasie.
USP32 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Usp32 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Usp32. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Usp32. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Usp32.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.