Particules Lentivirales d'Activation (m) USP25: sc-424423-LAC

Le gène murin *Usp25* code l’USP25, une enzyme déubiquitinante qui enlève des chaînes d’ubiquitine des protéines substrats afin de réguler leur stabilité, leur trafic intracellulaire et la transduction du signal. USP25 participe au contrôle, dépendant de l’ubiquitine, des voies inflammatoires et de l’immunité innée, notamment via la modulation de nœuds de signalisation associés à NF-κB et aux interférons, et contribue à la protéostasie en façonnant le renouvellement des effecteurs de ces voies. Une activité altérée d’USP25 a été associée dans la littérature à des réponses immunitaires dérégulées et à des processus de neuroinflammation, avec un intérêt pour des mécanismes étudiés en biologie des infections, en neurodégénérescence et dans des contextes de signalisation associés aux tumeurs. Ces propriétés font de *Usp25* un locus utile pour disséquer l’édition de l’ubiquitine dans les réponses au stress, la signalisation des cytokines et la régulation des états cellulaires dans des systèmes de modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales USP25 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Usp25 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales USP25 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Usp25, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de USP25. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Usp25 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.