Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UROS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423627
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- UROS El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico UROS, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UROS Anticuerpo (A-8): sc-365877
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
UROS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423627 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Uros codifica la uroporfirinógeno III sintasa (UROS), una enzima citosólica de la vía de biosíntesis del hemo que convierte el hidroximetilbilano en uroporfirinógeno III, el precursor fisiológico para la producción posterior de porfirinas y hemo. Este paso es esencial para mantener la disponibilidad celular de hemo necesaria para la respiración mitocondrial, la función de los citocromos y la homeostasis redox. La alteración de la actividad de UROS provoca la acumulación de isómeros de porfirinas no fisiológicos y perturba la maduración eritroide y las respuestas al estrés oxidativo. En modelos murinos, Uros se estudia con frecuencia para investigar el metabolismo de las porfirinas, la eritropoyesis y los mecanismos que vinculan el desequilibrio de la vía del hemo con la fotosensibilidad tisular y fenotipos asociados a la anemia.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO UROS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Uros en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Uros junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Uros tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UROS.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Uros para la investigación de la señalización de UROS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Uros críticos para la función de UROS
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Uros para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido UROS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UROS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Uros. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UROS (m) y el plásmido HDR UROS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Uros para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Uros definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.