Plasmide Double Nickase (h) UPIIIa: sc-401796-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) UPIIIa correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UPIIIa Double Nickase (h) et le plasmide UPIIIa Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant UPK3A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UPIIIa Antibody (C-6): sc-166808
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) UPIIIa | sc-401796-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) UPIIIa | sc-401796-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UPK3A code l’uroplakine IIIa (UPIIIa), une glycoprotéine membranaire de type I qui s’assemble avec d’autres uroplakines pour former des plaques urothéliales à la surface apicale des cellules parapluie de la vessie. Ce complexe contribue à l’intégrité de la barrière épithéliale, à la spécialisation membranaire et aux réponses à l’étirement mécanique, participant ainsi à la différenciation urothéliale et à l’homéostasie tissulaire. Les modifications des profils d’expression des uroplakines sont fréquemment utilisées comme indicateurs de l’état de l’urothélium et de l’identité de lignée dans les études du développement vésical et des pathologies associées. Les perturbations liées à UPK3A sont donc pertinentes pour la recherche sur le dysfonctionnement de la barrière urothéliale, le remodelage épithélial et les phénotypes moléculaires associés aux maladies de la vessie.
UPIIIa Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UPK3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UPK3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UPK3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UPK3A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.