UPase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423623

概要

マウスUpp1は、ウリジンホスホリラーゼ（UPase）をコードしている。UPaseはピリミジン・サルベージ経路の中核酵素であり、ウリジンをウラシルとリボース-1-リン酸へ可逆的にホスホロリシス（リン酸分解）する反応を触媒する。細胞内のヌクレオシドプールを調節することで、UPaseはRNA/DNA前駆体の利用可能性に影響し、増殖や代謝適応を支えるヌクレオチド代謝プログラムと統合されて機能する。Upp1の発現とUPase活性は、ヌクレオシド回転の変化が細胞恒常性を変え得る組織リモデリングやストレス応答の文脈で研究されてきた。代謝の結節点として、Upp1はしばしば、ピリミジン代謝とミトコンドリア機能およびレドックスバランス、さらに成長・生存表現型に影響する経路間クロストークとの関連を検証するために用いられる。

UPase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUpp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Upp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Upp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UPaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UPaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Upp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UPaseの機能に不可欠なUpp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Upp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UPase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUPase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Upp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UPase HDRプラスミド（m）および UPase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUpp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUpp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。