Plásmido CRISPR de Activación (h) UNC5H2: sc-402347-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) UNC5H2 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) UNC5H2 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR UNC5H2 (h) y el plásmido de activación CRISPR UNC5H2 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de UNC5B. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UNC5H2 Anticuerpo (1A9): sc-293240
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) UNC5H2 | sc-402347-ACT | 20 µg | $397.00 |
UNC5B codifica el receptor de netrina UNC5H2, un receptor transmembrana de señales de guía que regula la navegación axonal, la migración neuronal y la supervivencia celular mediante señalización dependiente de netrina y el comportamiento como receptor de dependencia en ausencia de ligando. UNC5H2 modula la dinámica del citoesqueleto y la adhesión a través de GTPasas de la familia Rho y de vías asociadas a adhesiones focales, influyendo en la motilidad direccional y el patrón tisular durante el desarrollo. En contextos no neuronales, UNC5B/UNC5H2 contribuye a la organización vascular y epitelial y puede afectar programas de apoptosis, proliferación e invasión. La desregulación de la señalización de UNC5B se ha asociado con fenotipos de migración y supervivencia celular alterados, relevantes para trastornos del neurodesarrollo y la biología del cáncer, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de vías de señalización.
UNC5H2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UNC5B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
UNC5H2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UNC5B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UNC5B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UNC5H2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UNC5B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UNC5H2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UNC5H2 en células tumorales con expresión de UNC5B silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.