UNC5H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405369

概要

UNC5Aは、ネトリン受容体であるUNC5H1をコードしており、リガンド依存的なシグナル伝達を介して軸索の進行方向の制御やニューロンの位置決めを担う膜貫通型のガイダンス分子です。UNC5H1はネトリン-1による誘引／反発シグナルの統合に関与し、下流のRhoファミリーGTPaseやMAPKに連動した経路を通じて、細胞骨格ダイナミクス、接着、移動挙動に影響を及ぼし得ます。神経発生にとどまらず、UNC5H1関連シグナルはアポトーシスの制御や上皮―間葉系様の細胞プログラムの調節とも関連づけられており、組織のパターニングや恒常性維持における役割を支持します。UNC5A/UNC5H1の発現異常や経路カップリングの変化は、神経発達障害およびがん生物学に関する研究で報告されており、ガイダンスから生存制御へのクロストークを解明するための機構的な結節点として用いられています。

UNC5H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUNC5A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UNC5A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UNC5Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UNC5H1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UNC5H1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UNC5A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UNC5H1の機能に不可欠なUNC5Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UNC5Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UNC5H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUNC5H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UNC5A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UNC5H1 HDRプラスミド（h）および UNC5H1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUNC5Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUNC5A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。