Plasmide CRISPR d'Activation (h) ULK2: sc-402558-ACT

ULK2 (UNC-51 like autophagy activating kinase 2) code une kinase sérine/thréonine qui agit comme un initiateur central de la macroautophagie, en coordonnant les premières étapes de formation des autophagosomes en réponse aux signaux liés aux nutriments et à l’état énergétique. ULK2 fonctionne au sein du complexe ULK et intègre des signaux en amont provenant de mTORC1 et de la voie AMPK afin de moduler des événements de phosphorylation reliant le stress métabolique au flux autophagique. Par son rôle dans la protéostasie, le contrôle qualité des organites et l’adaptation cellulaire au jeûne, ULK2 influence des processus tels que l’homéostasie mitochondriale et la résistance au stress. La dérégulation des programmes d’autophagie associés à ULK2 a été étudiée dans des contextes pertinents pour la neurodégénérescence, le métabolisme des cellules cancéreuses et la signalisation inflammatoire.

ULK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ULK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ULK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ULK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ULK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ULK2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ULK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ULK2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ULK2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ULK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.