UGT1A3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402839-ACT

UGT1A3 kodiert eine hepatische und intestinale UDP-Glucuronosyltransferase, die die Glucuronidierung lipophiler Verbindungen katalysiert und dadurch deren Wasserlöslichkeit erhöht, um die biliäre und renale Elimination zu unterstützen. Als Teil des Xenobiotika-Stoffwechsels der Phase II trägt UGT1A3 zur chemischen Entgiftung und zur metabolischen Homöostase bei, indem es endogene Moleküle wie Gallensäuren und steroidabgeleitete Substrate sowie eine Vielzahl unterschiedlicher Arzneistoffe konjugiert. Seine Aktivität ist in umfassendere Xenobiotika-Antwortnetzwerke eingebunden, die durch nukleäre Rezeptoren reguliert werden und die transkriptionelle Kontrolle arzneistoffmetabolisierender Enzyme und Transporter koordinieren. Eine veränderte UGT1A3-Expression oder funktionelle Variation ist relevant für interindividuelle Unterschiede im Metabolismus und in der Disposition von Xenobiotika und liefert Anhaltspunkte für mechanistische Studien in der Pharmakogenomik und Toxikologie.

UGT1A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT1A3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT1A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT1A3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT1A3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT1A3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT1A3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT1A3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT1A3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT1A3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.