Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGT1A10: sc-402837-ACT

UGT1A10 code une UDP-glucuronosyltransférase humaine qui catalyse la glucuronidation d’une grande diversité de substrats endogènes et xénobiotiques, augmentant leur solubilité afin de soutenir la détoxification et l’élimination de phase II. Cette enzyme contribue à l’homéostasie métabolique en régulant l’équilibre entre les composés lipophiles et leurs conjugués glucuronides excrétables, en interaction avec les réseaux intestinaux et hépatiques de métabolisme des médicaments. Des variations de l’expression ou de l’activité de UGT1A10 peuvent modifier l’exposition aux composants alimentaires, aux substances chimiques environnementales et aux médicaments, influençant la susceptibilité aux réponses indésirables aux traitements et au stress chimique. En tant que membre du cluster de gènes UGT1A, UGT1A10 est souvent étudié aux côtés d’autres isoformes UGT1A afin de préciser la sélectivité de substrat propre à chaque isoenzyme et les mécanismes de compensation des voies métaboliques.

UGT1A10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGT1A10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGT1A10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGT1A10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGT1A10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGT1A10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGT1A10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGT1A10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGT1A10 dans les cellules tumorales présentant une expression de UGT1A10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.