UFD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403304-ACT

UFD1LはUFD1をコードしており、UFD1–NPL4–VCP/p97複合体の中核構成因子です。この複合体は、ユビキチン認識とATP依存的なタンパク質の引き抜き（膜や巨大分子複合体からの抽出）を連結し、プロテアソーム分解へと導きます。この経路は、小胞体関連分解（ERAD）、リボソーム関連品質管理、ならびに停止したタンパク質複合体の解消を支え、ストレス下でのプロテオスタシス維持に寄与します。これらの過程を通じて、UFD1は細胞周期の進行、ゲノム安定性、そしてタンパク質折り畳み不全ストレスへの応答に影響を与えます。UFD1Lに関連する品質管理経路の破綻は、ストレス耐性の変化や、プロテオスタシスの破綻および染色体異常を伴う疾患で見られる表現型と関連付けられており、機序解明に基づく疾患モデル化に有用であることが示唆されます。

UFD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UFD1Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UFD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UFD1L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUFD1L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UFD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUFD1L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUFD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUFD1L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUFD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。