Ufc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409943

概要

UFC1は、E2様の結合（コンジュゲーション）酵素Ufc1をコードしており、UFM1（ubiquitin-fold modifier 1）結合システムの中核構成要素として、タンパク質基質のUFM化（ufmylation）を駆動します。この経路は、小胞体（ER）におけるプロテオスタシス、ERストレスシグナル伝達、ならびに分泌経路機能に関連する品質管理プロセスを協調的に制御し、リボソーム関連品質管理や細胞恒常性における役割も報告されています。UFC1を含むUFM化構成要素の破綻は、実験モデルにおいて神経発達表現型、造血系の欠陥、がん関連の細胞ストレス適応と関連づけられており、疾患生物学における重要性を支持しています。そのためUFC1は、ER機能、ストレス耐性、プロテオーム維持が細胞運命決定に影響する文脈で、頻繁に研究されています。

Ufc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUFC1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UFC1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UFC1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ufc1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ufc1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UFC1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ufc1の機能に不可欠なUFC1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UFC1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ufc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUfc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UFC1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ufc1 HDRプラスミド（h）および Ufc1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUFC1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUFC1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。