UCK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423608

概要

Uck1は、細胞質のサルベージ経路酵素であるウリジン‐シチジンキナーゼ1（UCK1）をコードしており、ウリジンおよびシチジンをリン酸化してUMPとCMPに変換することで、RNA合成、DNA複製、膜リン脂質代謝に必要なピリミジンヌクレオチドを供給します。ヌクレオチドプールのバランスを調節することにより、UCK1は増殖能、細胞周期の進行、ならびに複製や転写需要に関連したストレス応答に影響を及ぼします。マウス系では、ヌクレオチド恒常性における代謝の再配線や代償的フラックスを理解する目的で、UCK1活性はしばしばピリミジンのde novo合成やヌクレオシド輸送と併せて解析されます。ピリミジン代謝の異常は、増殖制御やゲノム維持が破綻する疾患で繰り返し認められる特徴であり、Uck1は経路に焦点を当てた機構研究に有用な結節点となります。

UCK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUck1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Uck1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Uck1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UCK1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UCK1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Uck1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UCK1の機能に不可欠なUck1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Uck1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UCK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUCK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Uck1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UCK1 HDRプラスミド（m）および UCK1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUck1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUck1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。