UBE2F Double Nickaseプラスミド (h): sc-406582-NIC

ヒトUBE2Fは、NEDD8をカリン（Cullin）基質へ受け渡すE2結合酵素をコードしており、カリン–RINGリガーゼ（CRL）の組み立てと制御、およびその下流にあるユビキチン依存的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持を支えます。UBE2Fは特定のカリンのネディル化状態を調節することで、細胞周期の進行、ストレス応答、DNA損傷シグナル伝達の主要な制御因子のターンオーバーに影響を与え、結果として転写プログラムや細胞恒常性に作用します。ユビキチン–プロテアソーム系およびネディル化経路の破綻は、がん化やストレス耐性の変化にしばしば関与するため、UBE2Fはタンパク質品質管理とシグナル伝達のクロストークの機構研究における有用な結節点となります。UBE2Fの機能解析は、選択的なカリンのネディル化がどのように基質認識や分解出力を偏らせるのかを、ヒト細胞で明らかにする助けとなります。

UBE2F ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBE2F 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBE2F内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBE2Fの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBE2Fが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。