UBE2E1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423577

概要

Ube2e1は、ユビキチン結合E2酵素であるUBE2E1をコードしており、E3リガーゼと協調してユビキチンを基質タンパク質へ転移させることで、プロテオスタシスおよびタンパク質の代謝回転を制御します。ユビキチン化における役割を通じて、UBE2E1は主要な制御因子タンパク質の安定性や活性を調節し、細胞周期の進行、DNA損傷応答、ならびにストレス適応性シグナル伝達の制御に寄与します。E2酵素活性の攪乱は、ユビキチン依存的な品質管理やシグナル伝達ネットワークを破綻させ得て、これらの過程は神経変性、炎症、腫瘍性形質転換といった病態にしばしば関与します。マウスモデルにおいてUbe2e1は、組織や疾患に関連する状況下で、E2ファミリーメンバー間のユビキチン経路の特異性および冗長性を解析するための扱いやすい結節点となります。

UBE2E1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUbe2e1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ube2e1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ube2e1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBE2E1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBE2E1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ube2e1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBE2E1の機能に不可欠なUbe2e1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ube2e1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBE2E1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUBE2E1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ube2e1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBE2E1 HDRプラスミド（m）および UBE2E1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUbe2e1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUbe2e1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。