UBC12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423575

概要

Ube2m は、NEDD8 をカリン（cullin）足場タンパク質へ転移する E2 結合酵素である UBC12 をコードしており、これによりカリン–RING ユビキチンリガーゼ（CRL）の活性化が可能となり、プロテオスタシス全般の制御に広く関与します。CRL 依存的ユビキチン化の調節を通じて、UBC12 は主要な制御タンパク質のターンオーバーを変化させ、細胞周期の進行、DNA 損傷応答、シグナル伝達、ストレス適応に影響を与えます。ネディル化（neddylation）の攪乱はタンパク質恒常性やチェックポイント制御を破綻させ得るため、Ube2m/UBC12 の機能は、がん生物学、神経生物学、炎症シグナルなどで頻繁に検討される経路と結び付いています。マウス系では、Ube2m の機能喪失研究により、ユビキチン様修飾ネットワークの機構解析や、それらが組織発生および疾患関連表現型に与える寄与の解明が可能になります。

UBC12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUbe2m遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ube2m内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ube2mのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBC12タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBC12シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ube2m欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBC12の機能に不可欠なUbe2mエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ube2mゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBC12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUBC12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ube2m遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBC12 HDRプラスミド（m）および UBC12 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUbe2mホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUbe2m標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。