UBC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418924

概要

マウスのUbcは、ポリユビキチンC（UBC）をコードしており、ユビキチン–プロテアソーム系によるATP依存的なタンパク質分解に必要なユビキチンモノマーの主要な供給源となっています。UBCは、主要な経路構成因子の安定性と活性を制御することで、ユビキチン化に駆動される細胞周期進行、DNA損傷応答、ストレス適応、炎症性シグナル伝達の調節を支えます。ユビキチン恒常性はプロテオトキシックストレスを緩衝し、シグナル出力のあり方を形作るため、ユビキチン供給の変化やプロテオスタシスの破綻は、神経変性、がんに関連する増殖制御、免疫調節異常のモデルでしばしば検討されます。そのためUbcは、マウス細胞におけるプロテアソーム依存的な品質管理、ユビキチン鎖動態、ならびにオートファジーやストレス応答経路とのクロストークを解析する目的で一般的に用いられています。

UBC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUbc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ubc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ubcのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ubc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBCの機能に不可欠なUbcエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ubcゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUBC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ubc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBC HDRプラスミド（m）および UBC HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUbcホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUbc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。