Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400273

概要

THは、カテコールアミン生合成における律速酵素であるチロシン水酸化酵素をコードしており、L-チロシンを、ドーパミン、ノルエピネフリン、エピネフリンの前駆体であるL-DOPAへと変換する反応を触媒します。その活性は、テトラヒドロビオプテリン（BH4）補因子の利用可能性、鉄依存的な触媒作用、ならびにリン酸化による制御を統合することで、ドーパミン作動性およびノルアドレナリン作動性ニューロン、さらに副腎髄質クロマフィン細胞における神経伝達物質産生量を調節します。チロシン水酸化酵素は、神経細胞の分化、シナプス小胞への神経伝達物質の取り込み（充填）、シナプス伝達、そしてレドックス恒常性やミトコンドリア機能に関連する細胞ストレス応答の中心的因子です。THの発現や活性の破綻は、ドーパミン欠乏、カテコールアミン作動性シグナル伝達の障害、ならびに神経変性に伴う回路機能不全との関連で広く研究されています。

Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、THのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tyrosine Hydroxylaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tyrosine Hydroxylaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tyrosine Hydroxylaseの機能に不可欠なTHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、THゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tyrosine Hydroxylase HDRプラスミド（h）および Tyrosine Hydroxylase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。