TXA2R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402468-ACT

TBXA2R kodiert den humanen Thromboxan‑A2‑Rezeptor (TXA2R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der Thromboxan A2 bindet und dadurch die Thrombozytenaktivierung, die Kontraktion der glatten Gefäßmuskulatur sowie inflammatorische Signalwege reguliert. Nach Ligandenbindung koppelt TXA2R vor allem an die Gq/11‑ und G12/13‑Signalwege und fördert damit die Aktivierung der Phospholipase C, die Mobilisierung intrazellulären Calciums, RhoA‑Signalgebung sowie nachgeschaltete MAPK‑Antworten, die Zellformänderungen, Sekretion und Adhäsion beeinflussen. Dieser Rezeptor verknüpft den Eicosanoid‑Stoffwechsel mit der hämostatischen und vaskulären Homöostase und wird häufig im Kontext der Thrombosebiologie, der Gefäßreaktivität und inflammatorischer Mikroumgebungen untersucht. Eine veränderte TXA2R‑Signalgebung wurde mit einer dysregulierten Thrombozytenfunktion und Mechanismen vaskulärer Pathologien in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Forschungsmodelle zu kardiometabolischen sowie immunassoziierten Erkrankungen unterstreicht.

TXA2R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TBXA2R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TXA2R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TBXA2R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TBXA2R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TXA2R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TBXA2R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TXA2R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TXA2R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TBXA2R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.