twist2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419989

概要

Twist2は、間葉系系譜のプログラムを制御する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子をコードしており、胚発生および組織恒常性の維持において、細胞運命決定、増殖、分化を調節する。マウスでは、twist2は上皮間葉転換（EMT）様プロセス、細胞外マトリックスのリモデリング、ならびに形態形成や間質細胞の挙動を規定するTGF-βやWntなどの経路とのクロストークに関連する転写ネットワークに影響を与える。TWIST2活性の変化は、発生異常や炎症・線維化応答の制御破綻と関連づけられており、結合組織生物学における遺伝子制御回路の研究に有用な結節点となる。機能喪失モデルは、Twist2が線維芽細胞、筋原性前駆細胞、免疫関連の間質コンパートメントにおいて転写抑制／活性化プログラムをどのように協調させるかを検討するための手段となる。

twist2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTwist2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Twist2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Twist2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、twist2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、twist2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Twist2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• twist2の機能に不可欠なTwist2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Twist2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• twist2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびtwist2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Twist2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  twist2 HDRプラスミド（m）および twist2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTwist2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTwist2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。