Twinkle Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432601

Panoramica

Il gene murino **Twnk** codifica l’elicasi del DNA mitocondriale **Twinkle**, un enzima codificato dal nucleo che svolge la funzione di svolgere il mtDNA durante la replicazione e di sostenere il mantenimento del numero di copie del genoma mitocondriale. Twinkle agisce all’interno del replisoma mitocondriale insieme a **POLG** e **mtSSB**, coordinando l’avanzamento della forcella di replicazione, la dinamica del D-loop e, più in generale, la biogenesi mitocondriale. L’alterazione di questa via compromette la capacità di fosforilazione ossidativa, modifica l’organizzazione dei nucleoidi mitocondriali e può innescare risposte compensatorie allo stress che rimodellano il metabolismo cellulare. La disfunzione di **TWNK** è associata a deplezione di mtDNA e a molteplici fenotipi di patologie mitocondriali, rendendo **Twnk** un locus chiave per modellare l’instabilità del genoma mitocondriale nella ricerca biomedica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Twinkle (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Twnk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Twnk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Twnk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Twinkle.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Twnk per lo studio della segnalazione di Twinkle, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Twnk critici per la funzione di Twinkle
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Twnk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Twinkle CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Twinkle CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Twnk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Twinkle Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Twinkle (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Twnk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Twnk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.