Tuba CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406569

概要

DNMBPは、膜シグナル伝達をアクチンおよび微小管の細胞骨格リモデリングへと結び付ける、多ドメイン型のRhoグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であるTubaをコードする。TubaはCDC42などの低分子量GTPアーゼを活性化し、さらにエンドサイトーシスおよび細胞接着関連複合体と協調することで、細胞極性、小胞輸送、ならびに接着結合（adherens junction）とタイトジャンクションの再編成の制御に寄与する。これらの機能によりDNMBPは、上皮組織の構築、神経突起伸長、移動依存的な形態形成を制御する経路に位置付けられる。Tubaが関与する細胞骨格シグナル伝達や極性ネットワークの破綻は、異常な細胞浸潤や神経発達関連の表現型といった文脈で示唆されており、疾患関連の細胞構築の機構研究における重要性を裏付けている。

Tuba CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNMBP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNMBP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNMBPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tubaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tubaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNMBP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tubaの機能に不可欠なDNMBPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNMBPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tuba CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTuba CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNMBP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tuba HDRプラスミド（h）および Tuba HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNMBPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNMBP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。