Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TTP Double Nickase Plasmid (m): sc-423781-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TTP Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TTP Double-Nickase-Plasmid (m) und TTP Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Zfp36 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TTP: sc-374305
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TTP Double Nickase Plasmid (m) | sc-423781-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Zfp36** kodiert Tristetraprolin (TTP), ein AU-reiche-Elemente-bindendes RNA-Bindeprotein, das die Deadenylierung und den Abbau kurzlebiger mRNAs fördert, darunter viele Zytokin- und Immediate-Early-Transkripte. Durch Rekrutierung des Deadenylase-Komplexes **CCR4–NOT** und Modulation der posttranskriptionellen Genregulation prägt TTP die inflammatorischen Signalausgänge nachgeschalteter Signalwege wie **TNF/NF-κB** und **MAPK/p38**. Eine veränderte Zfp36/TTP-Aktivität wird mit einer dysregulierten Zytokinhomöostase und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Aktivierung von Immunzellen, von Makrophagenantworten und stressinduzierter Transkript-Remodellierung untersucht. Als Knotenpunkt in Netzwerken des mRNA-Umsatzes bietet TTP einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie RNA-Stabilität Genexpressionsprogramme steuert, die für entzündungsassoziierte Pathologien relevant sind.
TTP Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Zfp36-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Zfp36 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Zfp36-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Zfp36-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.