Plásmido CRISPR de Activación (h) TTI1: sc-404313-ACT

TTI1 (proteína 1 que interactúa con TELO2) codifica un componente central del complejo TTT (TTI1–TTI2–TELO2), un correchaperón especializado que respalda la maduración, estabilización y ensamblaje de las quinasas relacionadas con la fosfatidilinositol 3‑quinasa (PIKK). En coordinación con HSP90, TTI1 ayuda a mantener la proteostasis y la competencia de señalización de miembros clave de la familia PIKK, incluidos mTOR, ATM y ATR, influyendo así en la respuesta al daño del ADN, el manejo del estrés replicativo, el control de los puntos de control (checkpoints) y la señalización relacionada con el crecimiento. La alteración de la homeostasis de PIKK dependiente de TTI1 puede modificar las vías de estabilidad del genoma y las redes de señalización adaptativas al estrés. Estos procesos son ampliamente relevantes para los mecanismos que subyacen a la biología del cáncer, los fenotipos del neurodesarrollo y los trastornos asociados con una reparación del ADN deficiente o con una regulación alterada de la vía de mTOR.

TTI1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TTI1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TTI1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TTI1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TTI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TTI1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TTI1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TTI1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TTI1 en células tumorales con expresión de TTI1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.