Plasmide CRISPR d'Activation (h) TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1: sc-400458-ACT

NKX2-1 code le facteur de transcription à homéoboîte TTF-1 (également appelé « Thyroid Transcription Factor 1 »), un régulateur déterminant de lignée des organes dérivés de l’endoderme, qui coordonne les programmes transcriptionnels nécessaires au développement et à la différenciation de la thyroïde, du poumon et du télencéphale antérieur. Dans la thyroïde, NKX2-1 contrôle l’expression de gènes impliqués dans la biosynthèse hormonale et la polarité épithéliale, tandis que dans l’épithélium pulmonaire il régule l’homéostasie du surfactant et la maturation alvéolaire. NKX2-1 s’intègre à d’autres voies du développement, notamment les signalisations WNT, BMP et FGF, afin d’établir et de maintenir des états d’expression génique spécifiques des tissus. Une activité dérégulée de NKX2-1 est associée à des phénotypes congénitaux thyroïdiens et respiratoires, et NKX2-1 est fréquemment utilisé comme marqueur moléculaire et nœud fonctionnel dans les études de la biologie des maladies thyroïdiennes et pulmonaires, notamment la plasticité de lignée et les réseaux transcriptionnels oncogéniques.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NKX2-1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NKX2-1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NKX2-1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NKX2-1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NKX2-1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.