Plasmide CRISPR d'Activation (h) TTC36: sc-414529-ACT

Le gène humain **TTC36** code une protéine contenant des répétitions tétratricopeptidiques (TPR), dont on prédit qu’elle agit comme une plateforme d’interactions protéine–protéine capable de moduler l’assemblage ou la stabilité de complexes multiprotéiques. Les protéines TPR influencent couramment la signalisation intracellulaire, le trafic des protéines et les voies de contrôle qualité en coordonnant les interactions avec les chaperonnes et la localisation subcellulaire. Bien que **TTC36** reste relativement peu étudié, son expression et ses réseaux d’interactions potentiels en font une cible pertinente pour explorer la régulation, dépendante du contexte, des programmes transcriptionnels et de la protéostase dans les cellules humaines. Une activité altérée des processus d’échafaudage associés aux TPR a été largement liée à une dérégulation du contrôle de la croissance et des réponses au stress, ce qui soutient l’intérêt de **TTC36** comme cible utile pour des recherches exploratoires sur les mécanismes de maladie.

TTC36 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TTC36 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TTC36 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TTC36 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TTC36, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TTC36. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TTC36 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TTC36 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TTC36 dans les cellules tumorales présentant une expression de TTC36 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.