TSPAN7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423425

概要

Tspan7 はテトラスパニンタンパク質 TSPAN7 をコードしており、TSPAN7 は多回膜貫通型の膜スキャフォールドとして、テトラスパニン富化マイクロドメインの形成・維持を担い、細胞表面における相互作用受容体の分布やシグナル伝達を調節します。マウスでは、TSPAN7 は膜輸送、細胞骨格の再構築、細胞間コミュニケーションなど、神経発達やシナプス構築に影響するプロセスに関与すると考えられており、他の細胞種においても接着や運動性に関わるプログラムへ影響し得ます。受容体のクラスター形成とその下流シグナルを形作る相互作用を介して、TSPAN7 はエンドサイトーシス、アクチン動態、特殊化した膜コンパートメントでのシグナル伝達に関連する経路に寄与します。テトラスパニンネットワーク機能の破綻は神経発達表現型や細胞間連結性の変化と関連づけられており、Tspan7 は膜マイクロドメイン生物学の機構研究に有用な遺伝子座です。

TSPAN7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTspan7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tspan7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tspan7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TSPAN7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TSPAN7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tspan7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TSPAN7の機能に不可欠なTspan7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tspan7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TSPAN7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTSPAN7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tspan7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TSPAN7 HDRプラスミド（m）および TSPAN7 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTspan7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTspan7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。