TSHβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423526

概要

Tshbは、甲状腺刺激ホルモン（TSH）のβサブユニット（TSHβ）をコードしており、下垂体由来の糖タンパク質ホルモンの構成要素として、甲状腺におけるTSHシグナル伝達の受容体特異性を規定します。甲状腺刺激細胞（thyrotroph）では、Tshbの発現は視床下部の甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（TRH）と、甲状腺ホルモンによる負のフィードバックによって制御され、内分泌恒常性と、下垂体の分化およびホルモン産生を司る転写プログラムとが統合されています。TSHβによるTSH受容体の活性化は、甲状腺ホルモンの生合成と全身の代謝調節を促進し、この軸を成長、エネルギーバランス、熱産生といった過程に結び付けます。Tshbおよび上流の視床下部—下垂体—甲状腺（HPT）系フィードバックの制御破綻は、中枢性甲状腺軸機能障害の実験モデルや、発生・代謝に影響する内分泌表現型と関連します。

TSHβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTshb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tshb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tshbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TSHβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TSHβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tshb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TSHβの機能に不可欠なTshbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tshbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TSHβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTSHβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tshb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TSHβ HDRプラスミド（m）および TSHβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTshbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTshb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。