Trypsin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423521

概要

マウスTry4は、塩基性残基の後でペプチド基質を切断し、細胞外でのタンパク質分解に寄与する分泌型セリンプロテアーゼであるトリプシン-4をコードする。細胞周囲空間におけるタンパク質ターンオーバーを調節することで、Try4はプロテアーゼ活性化受容体（PAR）シグナル伝達、生理活性ペプチドのプロセシング、ならびに細胞外マトリックスのリモデリングに影響を及ぼし得る。トリプシンファミリーに属する分子のプロテアーゼ活性は、他のセリンプロテアーゼや内因性阻害因子との協調的な作用を介して、炎症カスケードや上皮バリア動態とも交差する。プロテアーゼ—阻害因子バランスの変化は、組織損傷、炎症、腫瘍微小環境のリモデリングのモデルで頻繁に検討されるため、Try4は機序解明研究に有用な標的となる。

Trypsin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTry4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Try4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Try4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Trypsin-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Trypsin-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Try4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Trypsin-4の機能に不可欠なTry4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Try4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Trypsin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTrypsin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Try4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Trypsin-4 HDRプラスミド（m）および Trypsin-4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTry4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTry4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。