Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423520

概要

Prss3 は、リシンまたはアルギニン残基の後でタンパク質分解切断を触媒し、細胞外タンパク質の代謝回転に寄与する、分泌型セリンプロテアーゼであるトリプシン-3をコードしています。マウス組織では、トリプシン-3活性は、プロテアーゼ活性化受容体（PAR）シグナル伝達の構成要素をプロセシングしたり、セリンプロテアーゼインヒビターなどの内因性阻害因子と相互作用したりすることで、細胞周囲のリモデリングに影響を与え、炎症反応やバリア機能に関連する応答を形作る可能性があります。トリプシンファミリーによるプロテオリシスの制御不全は、細胞接着やマトリックス処理の変化を介して、上皮動態の異常、膵炎関連経路、ならびに腫瘍関連微小環境のリモデリングと関連づけられてきました。そのため、Prss3 は、分泌、組織恒常性、そしてプロテアーゼ駆動性のシグナル伝達カスケードを制御するプロテアーゼネットワークにおける役割について研究されています。

Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrss3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prss3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prss3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Trypsin-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Trypsin-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prss3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Trypsin-3の機能に不可欠なPrss3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prss3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTrypsin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prss3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Trypsin-3 HDRプラスミド（m）および Trypsin-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrss3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrss3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。