Trx CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423563

概要

マウスのTxn1はチオレドキシン（Trx）をコードしており、Trxは標的タンパク質のジスルフィド結合の還元を触媒することで細胞内のレドックス恒常性を維持する、保存性の高い酸化還元酵素です。Trxはチオレドキシン還元酵素およびNADPHとともにチオレドキシンシステムを構成し、MAPKやNF-κB経路を含むレドックス感受性シグナル伝達の制御や、代謝および炎症の過程で生成される活性酸素種（ROS）の緩衝に関与します。さらに、タンパク質フォールディングの制御、リボヌクレオチド還元酵素を介したDNA合成の補助、アポトーシスおよびオートファジーの調節を通じて、Txn1は細胞のストレス適応に広範に寄与します。チオレドキシン活性の異常は、神経変性、代謝機能障害、炎症性病態に関連する酸化ストレス表現型としばしば結び付けられるため、Txn1はレドックス駆動性の疾患プロセスを機構的に研究するうえで有用な結節点となります。

Trx CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTxn1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Txn1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Txn1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Trxタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Trxシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Txn1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Trxの機能に不可欠なTxn1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Txn1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Trx CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTrx CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Txn1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Trx HDRプラスミド（m）および Trx HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTxn1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTxn1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。