TrpRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423692

概要

Wars はトリプトファニル tRNA 合成酵素（TrpRS）をコードしており、これは細胞質に存在するアミノアシル tRNA 合成酵素の一種で、L-トリプトファンを対応する tRNA^Trp に結合させます。これにより、正確な mRNA 翻訳に必要な荷電 tRNA が供給されます。tRNA のアミノアシル化を制御し、リボソームの伸長反応を支えることで、TrpRS は栄養状態をタンパク質合成や細胞のストレス適応プログラムと結び付ける役割を担います。アミノアシル tRNA 合成酵素活性の攪乱は、プロテオスタシス、統合的ストレス応答シグナル、翻訳の忠実性に影響し得ます。これらの過程は、炎症、神経変性、がん化（腫瘍形成）といった現象にしばしば関与するとされています。そのため、マウス Wars は、翻訳能の変化が細胞状態や疾患関連表現型を in vitro および in vivo でどのように作り替えるかを研究するうえで有用な標的（ノード）です。

TrpRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWars遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wars内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Warsのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TrpRSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TrpRSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wars欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TrpRSの機能に不可欠なWarsエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Warsゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TrpRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTrpRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wars遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TrpRS HDRプラスミド（m）および TrpRS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWarsホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWars標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。