TRPM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403223

概要

TRPM5（transient receptor potential cation channel subfamily M member 5）は、細胞内カルシウム（Ca2+）シグナルに応答して活性化され、単価陽イオンを通すことで形質膜を脱分極させるチャネルです。ホスホリパーゼC（PLC）シグナルおよびIP3介在性のCa2+放出の下流で機能し、化学感覚細胞や分泌細胞などにおける刺激誘発性の電気活動やシグナル増幅を形成します。TRPM5活性は、味覚伝達などに関与するGPCR駆動性経路やその他のCa2+依存的細胞応答と関連しており、興奮性や下流の転写プログラムに影響を及ぼします。TRPM5の発現や機能の異常は感覚シグナルの変化と関連づけられており、がん細胞の挙動や代謝シグナルの表現型という文脈でも研究されています。

TRPM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRPM5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRPM5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRPM5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRPM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRPM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRPM5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRPM5の機能に不可欠なTRPM5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRPM5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRPM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTRPM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRPM5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRPM5 HDRプラスミド（h）および TRPM5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRPM5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRPM5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。