TRPC3/6/7 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403740

Visão geral

TRPC3 é um canal de cátions não seletivo, permeável a Ca2+, da subfamília TRPC3/6/7, que acopla a sinalização da fosfolipase C ativada por receptores à despolarização da membrana e à entrada de cálcio intracelular. A atividade do canal é regulada por diacilglicerol e integra sinais a jusante de vias de GPCR e de receptores tirosina-quinase, modulando a transcrição dependente de Ca2+, a remodelação do citoesqueleto, a secreção e a contratilidade. Complexos de canais contendo TRPC3 contribuem para a excitabilidade neuronal e a sinalização sináptica, bem como para a homeostase de cálcio em músculo liso e no coração por meio de comunicação cruzada com as vias de calcineurina/NFAT e MAPK. A desregulação do eixo TRPC3/6/7 tem sido associada a sinalização aberrante de Ca2+ em contextos de doenças cardiovasculares e neurodegenerativas e é frequentemente investigada em modelos de hipertrofia, fibrose e estresse excitotóxico.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRPC3/6/7 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TRPC3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TRPC3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TRPC3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRPC3/6/7.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TRPC3 para a investigação da sinalização de TRPC3/6/7, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TRPC3 críticos para a função TRPC3/6/7
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TRPC3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TRPC3/6/7 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TRPC3/6/7 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TRPC3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TRPC3/6/7 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TRPC3/6/7 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TRPC3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TRPC3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.