Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
TRP2/DCT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400334
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TRP2/DCT El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TRP2/DCT, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TRP2/DCT Anticuerpo (C-9): sc-74439
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TRP2/DCT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400334 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DCT codifica la dopacromo tautomerasa (TRP2/DCT), una enzima melanosomal que cataliza la conversión de dopacromo a DHICA durante la biosíntesis de eumelanina. Actuando aguas abajo de la tirosinasa y de forma coordinada con TYRP1, TRP2/DCT contribuye a la melanogénesis, la maduración de los melanosomas y el equilibrio redox en células productoras de pigmento. Su expresión está regulada por programas transcripcionales de linaje como MITF y se integra con vías que controlan la pigmentación y las respuestas al estrés oxidativo. Las alteraciones en la actividad o la expresión de DCT se han asociado con fenotipos de pigmentación y se estudian con frecuencia en el contexto de la biología del melanoma y la presentación de antígenos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRP2/DCT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DCT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DCT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DCT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRP2/DCT.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DCT para la investigación de la señalización de TRP2/DCT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DCT críticos para la función de TRP2/DCT
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DCT para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TRP2/DCT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRP2/DCT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DCT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRP2/DCT (h) y el plásmido HDR TRP2/DCT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DCT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DCT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.