TRP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400412-ACT

ヒトTYRP1は、チロシナーゼ関連タンパク質1（TRP1）をコードしており、色素産生細胞におけるユーメラニン合成とメラノソーム成熟を支える、メラノソーム膜局在の糖タンパク質酵素です。TRP1はTYRやDCTとともにメラノジェネシス（メラニン生成）ネットワークの中で機能し、メラニン中間体の酸化反応、メラノソームの安定性、さらにMITFシグナルなどの経路によって調節される色素形成表現型に影響を与えます。TYRP1の発現変動や遺伝子バリアントは色素異常症と関連し、メラニン経路活性の変化が細胞のストレス応答や分化状態に影響し得ることから、メラノーマ（悪性黒色腫）生物学の文脈でも研究されています。系譜関連のメラノサイトマーカーとして、TYRP1はメラノソーム生合成、色素代謝、そしてメラノサイト機能を制御する転写プログラムの解析にしばしば用いられます。

TRP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TYRP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TYRP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTYRP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTYRP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTYRP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。